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微生物傳感器的制備

來源 : www.ztmjt.com   發布時間 : 2014-08-14

  微生物傳感器的制備。

  1、敏感菌株的篩選。

  從遠離污染源的苗圃中取表層以下5~10cm處的土壤,稱取一定量的土樣将其制成土壤懸液進行平闆培養,待菌落長出使用接種環從待分離的平闆中挑取形态各異的單個菌落,經過反複分離、純化,篩選出10株純菌株,通過其在含氯化汞培養基中的生長情況,選擇出一株生長受氯化汞抑制程度最大的菌株X4。通過菌株形态結構特征的觀察、生理生化實驗和16SrDNA序列分析,X4菌株與多株芽孢杆菌(Bacillussimplex)的序列相似性達到99%。

  将分離得到的X4菌株在牛肉膏蛋白胨固體培養基平闆上劃線分離,反複進行3次,将菌落不斷純化,最終通過顯微鏡觀察,證明菌落中不再混有雜菌,然後将其轉接到斜面培養,待菌落長出後,于4℃下冰箱保存待用。

  2、固定化微生物膜的制備。

  将培養好的X4菌懸濁液在6280r/min的轉速下離心5min,倒去上清液,用pH=7.0的磷酸鹽緩沖溶液洗滌2次,倒去上清液,将獲得的濕菌體均勻塗于纖維素微孔濾膜上,另外在一張相同膜上用自制的塗膠工具将其四周均勻塗上粘合劑,最後将粘有粘合劑的膜輕輕放于塗有菌的微孔濾膜上,小心将膜的邊緣壓實即可,置于冰箱4℃保存待用。

  3、毒性微生物傳感器的組裝。

  将溶解氧電極内腔注滿電解液(氯化鉀-四硼酸鈉溶液),在陰極(4mm黃金片)表面覆蓋一層聚四氟乙烯薄膜,再将已制好的微生物膜用鑷子輕輕地夾起放在氧電極的塑料薄膜上,裝上帶有墊圈的電極帽并旋緊,保證兩層膜緊密接觸,将其與信号輸出裝置耦合便可構成微生物傳感器。其結構如圖1所示。

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