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氨基酸的柱前衍生技術

來源 : www.ztmjt.com   發布時間 : 2014-11-27

自上世紀80年代以來,應用高效液相色譜法測定氨基酸的研究發展迅速,特别是對柱前衍生-反相高效液相色譜法(RP-HPLC)的研究取得了顯著進展。相對于其它方法,RP-HPLC分析方法更加靈敏(可測知<1pmol水平)和快速(完成一種蛋白質的水解、分離和測定隻需12~30min),衍生反應也較便捷,易與儀器結合實現商品化。

RP-HPLC要求将氨基酸在柱前轉化為适于反相色譜分離并能被靈敏檢測的衍生物,其關鍵在于衍化生試劑的選擇。選擇衍生化試劑的标準包括:
  該試劑能與各氨基酸進行定量反應;每種氨基酸隻生成一種化合物;目标産物有一定的穩定性,不産生或易于排除幹擾物;便于實現自動化;産物能在不同型号的高效液相色譜儀上進行測定。目前國内應用較為廣泛的柱前衍生化試劑列于表1,最常用的柱前衍生試劑有鄰苯二甲醛(OPA)、異硫氰酸苯酯(PITC)、氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)、丹磺酰氯(Dansyl-Cl)及二硝基氟苯(FDNB)等。

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