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氨基酸分析的準确度與精密度

來源 : www.ztmjt.com   發布時間 : 2014-12-09

氨基酸分析

1.準确度

氨基酸分析的準确度常以下述三種方法來衡量:(1)具有理論值、順序儀測定值或其它文獻值的純蛋白各氨基酸的回收率;(2)添加回收率試驗;(3)線性響應檢驗,即将兩種已知氨基酸含量的樣品按一定比例混合起來,然後比較測定值與預期值的吻合程度。表2彙總了國内外常用氨基酸分析準确度檢驗的幾種方法及實際結果。由此可大緻看出目前氨基酸分析準确度的一般水平。FAO/WHO蛋白質量評價專家聯席會建議在比較不同方法時用氨基酸序列儀測得的理論值,即每mol純蛋白的殘基數來衡量。在實際樣品分析中則用各氨基酸及NH:的N回收率來檢驗,一個好的方法與分析結果,其N回收率應大于90%。對已知含有較多非氮基酸N的樣品,如酵母(它含有較多的核酸),其N回收率也應達80%~85%。
  2.精密度

氨基酸分析的精密度常以實驗室間聯合試驗的室内與室間變異系數-一重複性和再現性來衡量。自1951年以來世界上共進行了蛋白水解液聯合試驗19次,生理體戒聯合試驗一次。
  不難看出,蛋白水解液分析的精密度改進最為明顯,目前一般氨基酸的室内相對标準偏差為3%左右,室間達6%~7%。胧、蛋氨酸變異較大,室内變異4%~6%,室間8%~10%。色氨酸變異最大,室内變異可小于5%.然而室間變異一般可達8%一12%。标準氨基酸混合液的精密度已接近儀器制造商所宣稱的标準,純蛋白的精密度一般好于食品、飼料等的分析精密度。FAO/WHO蛋白質量評價專家聯席會認為現代氨基酸分析數據,其重複性(室内變異系數)可允許達5%,而再現性(室間變異系數)允許達10腸,但它指示上述聯合試驗大都是以IEC法為主進行的,隻有Miller和Allred,最近的試驗涉及了GLC和HPLC法,固此急需進行新方法特别是柱前衍生HPLC法的實驗室間聯合試驗。


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