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APT----氨基酸組成分析

來源 : www.ztmjt.com   發布時間 : 2015-05-10

——即蛋白質藥物的氨基酸組成分析技術服務

蛋白質藥物的氨基酸組成分析是應用高效液相色譜法對經過水解的蛋白質所得氨基酸進行高效、靈敏、快速的定量分析。蛋白質在6 mol HCL中真空狀态下經過110℃/24h水解完全形成遊離氨基酸,再通過異硫氰酸苯酯(PITC)對所得氨基酸衍生化,用高效液相色譜對所得的衍生産物進行梯度洗脫,使得不同氨基酸衍生物分離開來,通過外标法對每個氨基酸衍生物的含量進行測定,進而得知蛋白質樣品中氨基酸的含量信息。

氨基酸分析

大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性,标準折射探測儀對氨基酸檢測也無足夠的靈敏度。為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性,通常将氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生和柱後衍生兩種。柱前衍生法常用的有:鄰苯二甲醛(OPA)法、丹磺酰氯(DANSYL-Cl)法、磺酰氯二甲胺偶氮(DABSYL-Cl)法、氯甲酸芴甲酯(FMOC- Cl)法、異硫氰酸苯酯(PITC)法等;柱後衍生法常用的有:茚三酮法、鄰苯二甲醛(OPA)法、熒光胺法等。其中柱前衍生法中異硫氰酸苯酯(PITC)法以其衍生方便快速,衍生物單一穩定,分析時間短,結果準确,試劑、副産物、溶劑等多種幹擾因素可通過快速蒸發去除,紫外檢測(254nm)靈敏度高、可達1pmol,一、二級氨基酸均可檢測等優點,成為蛋白質組成分析的重要手段。

現代分離提純技術的發展使蛋白質操作微量化,但也給定量帶來了困難,一般很難通過常規的稱量或測試蛋白質溶液在280nm的光吸收值來準确定量蛋白質,所以将蛋白質水解成遊離的氨基酸,對氨基酸進行定量從而來推算蛋白質的含量成為較可靠的方法。按照中國藥典對蛋白質藥測試的規定,氨基酸組成分析的相對定量已經能夠滿足檢測要求,對蛋白質類藥物進行相應的質控和結構的分析,以及樣品是否為蛋白質的鑒别。


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